2.實驗室檢測方法

　　(1)Real-time RT-PCR方法

　　各網(wǎng)絡(luò)實驗室應(yīng)用Real-time RT-PCR方法檢測甲型H1N1流感病毒。建議首先篩選甲型流感病毒并排除季節(jié)性流感H1、H3亞型病毒和禽流感 H5N1病毒，并同時檢測swInfA和swH1特異性基因片段。

　　(2)RT-PCR方法

　　中國疾病預(yù)防中心國家流感中心同時設(shè)計了RT-PCR方法檢測甲型H1N1流感病毒。建議首先篩選甲型流感病毒并排除季節(jié)性流感H1、H3亞型病毒和禽流感 H5N1病毒，并同時檢測H1HA和SWH1HA-1特異性基因片段。

　　(3)病毒分離

　　按照相關(guān)生物安全規(guī)定，有條件的實驗室可同時接種MDCK細胞和SPF雞胚，進行甲型H1N1流感病毒分離和基因序列測定。

　　3.標本上送

　　(1)各網(wǎng)絡(luò)實驗室檢測甲型H1N1流感病毒陽性的，應(yīng)盡快將原始標本和病毒分離物送中國疾病預(yù)防控制中心病毒病所進行檢測、復(fù)核、確認。

　　(2)全國所有實驗室在季節(jié)性流感哨點監(jiān)測和流感樣病例暴發(fā)疫情監(jiān)測中，檢測甲型流感病毒陽性，季節(jié)性流感病毒H1、H3亞型和禽流感病毒H5N1亞型陰性，但無法鑒定亞型的標本，應(yīng)盡快送中國疾病預(yù)防控制中心病毒病所進行檢測、鑒定。

　　4.生物安全

　　甲型H1N1流感病毒及其樣本的采集和儲存應(yīng)遵照世界衛(wèi)生組織發(fā)布的《實驗室檢測指南》進行。甲型H1N1流感病毒及其樣本運輸、實驗活動及風(fēng)險評估應(yīng)按照世界衛(wèi)生組織手冊(第三版)及《引起當前全球疫情的甲型H1N1流感疑似或確診樣本操作實驗室生物風(fēng)險管理》推薦技術(shù)指南(5月6日發(fā)布)進行，其中樣本檢測活動在生物安全二級實驗室進行，病毒分離和培養(yǎng)活動須在生物安全三級實驗室進行。實驗室工作人員須采取與實驗活動相適應(yīng)的個人防護措施，并對人員進行必要的健康監(jiān)測。相關(guān)實驗室須儲備充足的個人防護用品、實驗室消毒用品和適量的預(yù)防和治療藥物(如扎那米韋或奧塞他韋)。實驗活動相關(guān)廢物處理須嚴格按照我國生物安全管理法律法規(guī)進行。

　　5.檢測結(jié)果報告和反饋

　　各網(wǎng)絡(luò)實驗室在獲得確切實驗室檢測結(jié)果后，應(yīng)立即向各省級衛(wèi)生行政部門、中國疾病預(yù)防控制中心和衛(wèi)生部報告。中國疾病預(yù)防控制中心在獲得實驗室檢測結(jié)果后，應(yīng)立即向衛(wèi)生部報告，同時反饋給送檢標本的實驗室。

　　(五)病例排查和訂正

　　實驗室檢測結(jié)果應(yīng)及時反饋給病例報告單位。對于明確診斷為其他疾病或明確排除甲型H1N1流感的病例，報告單位應(yīng)在接到實驗室檢測結(jié)果2小時內(nèi)將病例訂正為已明確診斷的疾病或“其他不明原因疾病”。對于診斷分類變化的病例，如疑似轉(zhuǎn)為確診病例等，報告單位應(yīng)在接到實驗室檢測結(jié)果后2小時內(nèi)訂正。

　　(六)病例診斷與疫情公布

　　各省首例甲型H1N1流感確診病例的標本應(yīng)送中國疾病預(yù)防控制中心進行檢測、復(fù)核，由衛(wèi)生部組織專家組，結(jié)合病例的臨床、流行病學(xué)和實驗室等證據(jù)進行診斷結(jié)果的確認，并統(tǒng)一發(fā)布疫情。

　　首例病例確認并公布后，各省甲型H1N1流感病例由各省級衛(wèi)生行政部門組織本省專家組進行診斷，省級衛(wèi)生行政部門經(jīng)衛(wèi)生部授權(quán)后，負責(zé)向社會發(fā)布本行政區(qū)域內(nèi)甲型H1N1流感疫情信息。

　　四、加強季節(jié)性流感監(jiān)測

　　(一)加強哨點監(jiān)測

　　1.開展半年監(jiān)測的省份自本方案下發(fā)之日起，開展全年監(jiān)測，包括北京、天津、河北、山西、內(nèi)蒙古、遼寧、吉林、黑龍江、山東、河南、西藏、陜西、甘肅、青海、寧夏、新疆。其余南方片省份繼續(xù)開展全年監(jiān)測。

　　2.在原有全國84家網(wǎng)絡(luò)實驗室和197家哨點醫(yī)院的基礎(chǔ)上，中國疾病預(yù)防控制中心應(yīng)及時對各省份其他地市級實驗室的評估，逐步將具備檢測能力的實驗室納入流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實驗室。

　　3.各哨點醫(yī)院要加強門急診ILI和門急診就診總數(shù)的及時按周報告。各省級疾控中心要每周分析監(jiān)測數(shù)據(jù)，重點分析流感樣病例的比例、病毒分離陽性率、監(jiān)測工作完成及時性等指標，通過分析，及時觀察、評估流感活動的異常變化情況，并及時向各級衛(wèi)生行政部門和中國疾病預(yù)防控制中心報告。

　　4.各監(jiān)測哨點醫(yī)院，在原方案要求每周采集門急診ILI病例的呼吸道標本5-15份基礎(chǔ)上，增加到20-30份。

　　(二)流感樣病例暴發(fā)疫情監(jiān)測

　　各級各類醫(yī)療機構(gòu)和疾病預(yù)防控制機構(gòu)根據(jù)衛(wèi)生部下發(fā)的《流感樣病例暴發(fā)疫情報告及調(diào)查處理指南(試行)》(衛(wèi)辦疾控發(fā)[2006]108號)文件要求，要加強流感樣病例暴發(fā)疫情的監(jiān)測、報告，以及標本采集和實驗室診斷。

　　(三)實驗室檢測程序

　　各網(wǎng)絡(luò)實驗室首先應(yīng)用Real time RT-PCR和/或RT-PCR檢測乙型流感病毒、甲型流感病毒、季節(jié)性流感H1、H3亞型、禽流感H5N1亞型和甲型H1N1流感的特異基因片段。然后根據(jù)核酸檢測的結(jié)果，分別在生物安全2級和3級實驗室，進行季節(jié)性流感病毒、禽流感H5N1病毒和甲型H1N1流感病毒的分離培養(yǎng)。

　　如甲型流感病毒陽性,排除上述亞型流感病毒，仍無法鑒定亞型的臨床標本、以及禽流感H5N1病毒或甲型H1N1流感病毒分離物等送中國疾病預(yù)防控制中心病毒病所檢測、鑒定。

　　五、中國疾病預(yù)防控制中心技術(shù)支持部門和聯(lián)系方式

　　(一)疾病控制與應(yīng)急處理辦公室：負責(zé)疫情的追蹤、協(xié)調(diào)和接收疫情相關(guān)資料。

　　電話：010-63132071，傳真：010-63131229，值班手機：13699123721，電子郵箱：cdchb@chinacdc.cn

　　(二)實驗室管理處：負責(zé)標本運輸相關(guān)審批。

　　電話：010-63132237，傳真：010-63132235，

　　值班手機：13811698250

　　(三)病毒病所：負責(zé)標本接收和實驗室檢測。

　　標本接收電話：010-63536459，傳真：010-63536459

　　國家流感中心實驗室技術(shù)支持電話： 010-63580764，

　　傳真：010-63580764